抗诉是不可以再申请笔迹鉴定的，而且对于笔迹鉴定只可以在一审里面提出来，同时对于抗诉很显然就是属于再审的情况；一般是不可以进行要求的，但如果是属于违法的做笔迹鉴定那么就可以再重新申请。
一、抗诉可不可以申请笔迹鉴定？
不能申请，笔迹鉴定只能在一审时提出，笔迹鉴定，是对人通过书写活动形成的字迹进行的鉴认、识别活动。人的书写习惯具有特定性和稳定性，并在笔迹中得到反映。通过对笔迹的检验，可判明文件中的笔迹由几个人所写，是否由某人所写，利用笔迹进行人身同一认定，证实文件的真伪。
鉴定时要了解案件有关情况，明确鉴定要求，査验笔迹物证和笔迹样本;分析判断笔迹是否正常，有无伪装或由于其他原因引起的变化;选择能反映书写人书写习惯的稳定的和带有特殊意义的特征;对检材和样本中找出的特征进行比较，找出符合点和差异点;对符合点和差异点的形成原因综合评断;做出鉴定意见并制做鉴定书。
笔迹鉴定既要重视对差异点的评断，也要重视对符合点的评断，不能片面地否定一方面就盲目的肯定另一方面，即在确定差异点属于非本质的性质以后，就贸然做出肯定同一结论是不科学的。符合点也有本质的符合和非本质的符合之分，如果检材笔迹与样本笔迹相同特征的数量、质量占绝对优势，即构成本质符合性质;如果两者相同特征在数量、质量方面占的比例小，即属于非本质性的符合。
二、 笔迹鉴定的内容
1、比较书写动作一般状况特征、文字布局特征、书面语言特征的相同与不同;
2、比较单字或笔画单个特征的相同与不同;
3、比较各组特征的相同与不同;
4、比较各类特征的相同与不同;
5、对于字迹多的检材，比较检验时要对上述四方面的相同特征和不同特征进行精确地统计分析，用数学方法反映书写习惯的量与质方面的异同。比较笔迹特征异同的方法，是以目力观察比较为主，并借助于摄影仪、比较显微镜、幻灯片进行形态比较。
综合上面所说的，笔迹鉴定就是属于执法人员对他人写的笔迹而进行做的鉴定行为 ，对于此行为如果案件出现了抗诉的行为，那么此鉴定就不能再进行认定了，所以，在处理的时候就一定要按流程来进行办理，在抗诉的时候同样也必须要有合法的依据才能进行处理。